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【原】青蒿琥酯对急性胰腺炎动物模型的治疗作用及机制

来源 : 互联网
作者 : 118期刊网
发布时间 : 2019-04-13 00:26:16

第1章前言


急性胰腺炎不是局限于胰腺和周围组织的局部炎症反应,但可引起低血压,器官灌注不足,成人呼吸窘迫综合征(ARDS),多器官功能衰竭综合征(多器官功能障碍,MODS)等症状直至死亡[1 ]。后者是全身性炎症反应综合征(SIRS),其归因于重症胰腺炎(SAP)中的早期胰腺无菌性坏死和胰酶活化。胰腺释放的内容刺激机体产生大量细胞因子和炎症介质,引起持续的全身炎症反应,最终导致身体组织和器官异常或紊乱的复杂过程[2]。目前认为感染和SIRS是影响SAP发生,发展和结果的关键因素[3]。通常,急性胰腺炎是轻微且可控的,但最终被诊断为SAP的患者占四分之一,原因是局部并发症或全身并发症。近一半的重症急性胰腺炎患者会出现SIRS,20-30%的重症患者会死于MODS。研究表明,SAP与SIRS结合时间越长,患者的预后越差。根据SAP患者手术时机是临床实践中争议最多的话题之一,目前急性胰腺炎的治疗仍以综合医疗为基础。对于这种炎症没有非常有效的药物,因此发现抗炎治疗药物具有重要的经济论文翻译和社会意义。

青蒿琥酯是抗疟青蒿素(AS)的水溶性衍生物。青蒿琥酯具有多种药理作用,并已被证明具有抗疟,抗肿瘤,治疗弓形虫感染,抗血吸虫,抗妊娠,抗哮喘,抗病毒等药理作用[4]。此外,大量报道报道了青蒿琥酯的抗炎作用。 Liang Aihua等报道,青蒿琥酯在体内和体外均显着抑制巨噬细胞内毒素的活化,表明青蒿琥酯可以减少内毒素引起的炎症反应[5] [6]。王艳艳等报道,青蒿琥酯能显着降低滑膜细胞中Bcl-2和NF-κB的蛋白表达水平,从而有效改善佐剂性关节炎大鼠的滑膜病变[7];酯类通过调节NF-κB活性抑制脂多糖诱导的类风湿性关节炎滑膜细胞分泌TNF-α,提示青蒿琥酯可抑制类风湿性关节炎的滑膜炎症[8]。 Chen.H等发现中等剂量的青蒿琥酯对系统性红斑狼疮样过敏性接触性皮炎的小鼠模型具有良好的抑制作用[9];高春芳等也发现艾蒿酯对小鼠系统性红斑痤疮模型具有显着的治疗作用[10]。我们小组以前的研究也表明,青蒿琥酯可抑制LPS诱导的单核巨噬细胞释放炎症因子,对细菌性败血症小鼠具有显着的保护作用[11]。综上所述,急性胰腺炎是一种炎症性疾病,从局部炎症发展到全身,青蒿琥酯具有一定的抗炎作用,因此推测青蒿琥酯可能对急性胰腺炎有治疗作用。本研究首先建立了急性胰腺炎的小鼠和大鼠模型,并基于这些模型,研究了青蒿琥酯治疗急性胰腺炎的疗效。为了解释青蒿琥酯作为急性胰腺炎的潜在治疗方法的潜力,促进了急性胰腺炎治疗研究的发展。


第二章青蒿琥酯对重症急性胰腺炎小鼠的治疗作用


2.1材料和方法

2.1.1实验动物:昆明小鼠(清洁级),18-22克,4-6周,半雄性和雌性,第三军医大学实验动物中心,执照号SCXK-(Jun)2007015。

2.1.2主要试剂生理盐水西南制药公司

Hylathropin Peptide Biotech(Shanghai)Co.,Ltd。

脂多糖(大肠杆菌055:B5)美国西格玛

武汉博士特公司4%多聚甲醛

青蒿琥酯注射液桂林南方药业有限公司

Amylase kit南京建成研究所

胰蛋白酶试剂盒南京建成研究所

脂肪酶试剂盒南京研究院

超氧化物歧化酶试剂盒南京建成研究所

2.1.3主要工具

YP6001M台式电子天平上海科学仪器有限公司

FA2104N杭平电子天平上海科学仪器有限公司

MA11 0分析天平沉阳龙腾电子有限公司

相机日本佳能公司

SC-15型数字

cal控制超恒温罐宁波鑫智生物有限公司

GB11240-89型电加热恒温水浴锅北京医疗器械宜成公司

VORTEX-GENIUS3型涡旋振荡器德国IKA公司

SC-48高通量组织研磨机宁波新智生物有限公司

1500-741全波长扫描仪US Thermo Company

3K18低温高速离心机美国Sigma

TDL-50B台式低速离心机上海安亭科学仪器厂

纯水机美国Millipore公司

96孔微孔板US corning

移液器Eppendorf

无菌注射器上海康德莱公司

冰箱海尔集团

LKB2088徕卡超薄切片机

TECNAI10透射电子显微镜飞利浦

SKT84型聚合釜上海科技大学

LKB7800制刀机Bromma公司

MN-72磨刀器SAKURA

820石蜡切片机美国AO公司

CH30光学显微镜日本奥林巴斯公司

Photomicroscope日本奥林巴斯公司

2.1.4动物模型的制作

2.1.4.1健康洁净级昆明小鼠,体重18-22g,雄性8只,雌性8只,购自三毛大学实验动物中心,证书号SCXK-(Jun)2007015;

2.1.4.2称重16只小鼠后,将它们完全随机分成2组,每组8只。即,正常组和模型组;

2.1.4.3 16只实验小鼠在给药前禁食14小时,但应正常饮水;

2.1.4.4用无菌盐水制备10μg/ mL的雨蛙肽和1 mg / mL的脂多糖。脂多糖的制备方法:将相应量的脂多糖冻干粉加入相应的无菌生理盐水中,摇匀2-3小时,待其完全溶解后,备用;

2.1.4.5腹腔注射雨蛙肽100μg/ kg,1次/小时,连续6次注射,6次注射雨蛙肽,按10mg / kg腹腔注射脂多糖,诱导AP模型;

2.1.4.6采血后,颈椎脱位处死小鼠,剖腹产胰腺,称为湿重;

2.1.4.7观察胰腺和周围组织,拍照并称重:记录水肿,充血,坏死等.2.1.4.8取适量胰腺组织,按体积(ml)加入:体重(克)= 9:1。 9倍体积的4°C预冷盐水,然后用高通量组织研磨机使组织匀浆,浓度为原组织的10%,(研磨20 s /次,50 Hz,3~4次,需要在冰浴中),离心10分钟,3500转/分钟,取上清液-20℃保存,确定生化指标;

2.1.4.9建模完成后18小时采集血液,通过眼睑采血收集实验小鼠的血液,无需抗凝。将收集的血液样品置于4℃下2小时,以3500r / min离心12分钟。取上清液,置于-20°C的冰箱中测量各种生化指标。

2.2结果

2.2.1模型建立后检测相关指标

2.2.1.1模型小鼠胰腺组织的总体观察

正常组的小鼠具有良好的饮用水和活动,没有任何异常反应。在解剖学期间,在小鼠的胰腺组织中未观察到明显的异常。胰腺和周围组织的结构非常清晰。胰腺的颜色是正常的。没有观察到水肿或充血。腹腔无明显积液。出血性和坏死性病变。模型组成功建模18小时后,胰腺组织体积增大,胰腺质地稍硬,边界结构模糊,出现明显肿胀和充血。胰头和胰尾水肿最突出,颜色为深红色。胰腺表面有许多皂化点;腹腔内有少量积液,肠系膜和网膜有明显的皂化点,胰腺与周围组织粘连严重。

2.2.1.2胰腺系数的变化

实验结果表明,模型组胰腺系数明显高于正常组(n = 8,P <0.05)(图2)。提示成功建立了雨蛙苷联合脂多糖诱导的急性胰腺炎模型。


第二章青蒿琥酯对重症急性胰腺炎小鼠的治疗作用

2.1材料和方法

2.2结果

2.3总结

第三章青蒿琥酯对重症急性胰腺炎大鼠的治疗作用

3.1材料和方法

3.2结果

3.3总结

第一章

青蒿琥酯治疗急性胰腺炎的V分子机制

4.1材料和方法

4.2结果

4.3总结


全文讨论


首先是急性胰腺炎和败血症

急性胰腺炎是一种常见的临床疾病,发病率高,起病急,病情发展迅速而复杂。它不仅局限于胰腺及其周围组织的局部炎症反应,还可能出现低血压,器官灌注,成人呼吸窘迫综合征,多器官衰竭综合征和死亡等症状[13]。也就是说,急性胰腺炎可以从最初的胰腺组织局部病变迅速发展为全身炎症反应综合征,败血症,脓毒性休克甚至多器官衰竭,甚至死亡。全身炎症反应综合征,SIRS,是由于早期SAP中胰腺的无菌性坏死和胰酶的激活。胰腺释放的内容刺激身体产生大量的炎症介质和细胞因子,导致持续的全身性炎症。这种反应最终导致整个身体组织和器官功能异常的复杂过程[14]。目前认为感染和SIRS是影响SAP发生,发展和结果的关键因素[15]。在大多数情况下,急性胰腺炎是轻度和可控的,但局部和/或全身并发症仍可导致高达25%的重症急性胰腺炎。 50%的重症急性胰腺炎患者发生SIRS,而20-30%的重症患者死于MODS。因此,深入了解SAP败血症的发病机制和新型有效药物的研究对SAP早期有效的临床干预有很大帮助。

急性胰腺炎是由各种原因引起的全身性炎症反应综合征。脓毒症是由感染因子引起的SIRS,也称为SIRS亚型。鉴于SIRS在整个急性胰腺炎中的病理生理过程,如果SIRS的早期阶段未得到有效控制,脓毒症和感染性休克将在晚期发生,多器官衰竭的风险将大大增加,并且死亡率也会增加。增加4到5倍。因此,急性胰腺炎的本质是SIRS和败血症。


全文摘要


I.青蒿琥酯对急性胰腺炎小鼠的治疗作用

1.成功建立了由雨蛙苷联合LPS诱导的急性胰腺炎小鼠模型。

2.通过青蒿琥酯治疗,急性胰腺炎小鼠胰腺组织病理改变程度明显改善,血清AMS,胰蛋白酶,脂肪酶活性和MDA含量显着降低,胰腺SOD活性显着升高。 。


二,青蒿琥酯对重症急性胰腺炎大鼠的治疗作用

1.通过逆行注射牛磺胆酸钠进入胰管,成功建立了重症急性胰腺炎大鼠模型。

2.通过青蒿琥酯治疗,重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织严重程度明显改善,血清AMS,胰脂肪酶活性和MDA含量显着降低,胰腺SOD活性显着升高。 IL-6也显着减少。


青蒿琥酯治疗急性胰腺炎的分子机制

通过逆行注射胶原酶进入胰管,成功分离出大鼠胰腺腺泡细胞。

2.青蒿琥酯对LPS刺激的腺泡细胞的干预。 Elisa和RT-PCR分析显示,青蒿琥酯抑制胰腺腺泡细胞释放IL-6和IL-1β,降低IL-6。 IL-1β,TLR2,TLR4和p65的mRNA表达。

3.青蒿琥酯可通过抑制TLRs / NF-κB通路的激活,减少促炎因子的产生,发挥抗炎作用,抑制重要分子的表达。


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